Високоефективна рідинна хроматографія

Хроматографія – фізико-хімічний метод розділення та аналізу сумішей. Метод базується на розподілі компонентів суміші між двома фазами – нерухомою і рухомою (елюєнт), яка протікає через нерухому.

Метод хроматографії розроблений в 1903 році М.Цвєтом, який показав, що при пропусканні суміші рослинних пігментів через шар безбарвного сорбенту індивідуальні речовини розташовуються у вигляді окремих забарвлених зон. Отриманий таким чином стовпчик сорбенту Цвєт назвав хроматограмою, а метод – хроматографією. У 1941 році А.Мартін та Р.Сінг відкрили метод розподільної хроматографії і показали його широкі можливості для дослідження білків та вуглеводів. У 50-і роки А.Мартін і вчений А.Джеймс розробили метод газо-рідинної хроматографії.

Високоефективна рідинна хроматографія

Високоефективна рідинна хроматографія (ВЕРХ) – найбільш ефективний метод аналізу органічних зразків складної будови. Процес аналізу проби відбувається у два етапи – розділення проби на складові компоненти та детекція і вимірювання кожного компоненту.

Розділення відбувається за рахунок спеціальної хроматографічної колонки, яка являє собою трубку, заповнену сорбентом. При проведенні аналізу через хроматографічну колонку подають рідину (елюент) певного складу з постійною швидкістю. В цей потік додається точно виміряна доза проби. Компоненти проби, завдяки різній спорідненості до сорбенту колонки, рухаються по ній з різною швидкістю і досягають детектору в різні проміжки часу.

Таким чином, хроматографічна колонка відповідає за селективність і ефективність розділення компонентів. Підбираючи різні типи колонок можна керувати ступенем розділення речовин, які аналізуються. Ідентифікація сполук здійснюється по часу їх утримання. Кількісне визначення кожного з компонентів розраховують, виходячи з величини аналітичного сигналу, виміряного за допомогою детектора, який під’єднується до виходу хроматографічної колонки.

Метод ВЕРХ використовується в санітарно-гігієнічних дослідженнях, екології, медицині, фармації, нафтохімії, криміналістиці, для контролю якості та сертифікації продукції.

У централізованому відділенні автоматизованої лабораторної діагностики Рівненського обласного клінічного лікувально-діагностичного центру ім. В.Поліщука методом високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ) на хроматографі UltiMate 300 RS (який є єдиним в Україні) проводиться визначення амінокислотного складу сироватки крові.

Для дослідження необхідно 1 мл. плазми крові. Забір крові проводиться вакуумними системами натще після відповідної підготовки.